Mengapa kita menggunakan kawalan negatif dalam PCR?

Mengapa kita menggunakan kawalan negatif dalam PCR?
Anonim

Jawapan:

Lihat di bawah

Penjelasan:

PCR berfungsi daripada DNA templat. Katanya anda sedang menguji HIV (HIV adalah virus RNA, tetapi apabila ia masuk ke sel, ia akan berubah menjadi DNA …. jadi akan ada DNA HIV dalam sel yang dijangkiti). Primer yang anda gunakan akan membuat produk (amplicon) yang sepadan dengan sebahagian daripada DNA HIV. Jika anda melihat amplicon ini, maka anda mempunyai urutan HIV yang hadir ….. tetapi jika anda tidak mempunyai kawalan negatif, anda mungkin mempunyai pencemaran.

PCR adalah sangat penting. Terdapat banyak penyelesaian yang digunakan dalam PCR (air, penampan, dNTPs, enzim) … dan mereka semua boleh dengan mudah dicemari dengan DNA dari sampel lain, atau bahkan dari amplicon yang dibuat dalam reaksi yang anda lakukan semalam. Oleh itu, jika anda mempunyai sampel DNA Pesakit X dan anda memeriksa HIV oleh PCR, primer PCR boleh mengeluarkan produk DNA HIV dalam sampel DNA Pasien X (jika orang itu mempunyai HIV), atau ia boleh membuangnya pencemaran. Tetapi anda tidak dapat mengetahui sama ada ia berasal dari pencemaran atau daripada HIV pada pesakit DNA.

Jadi anda menjalankan kawalan air. Tiub 1 anda meletakkan semua komponen tindak balas, dan untuk DNA anda hanya menambah air. Ini adalah kawalan negatif. NOTHING perlu dikuatkan di sini. Dalam Tube 2 anda meletakkan semua komponen tindak balas dan DNA Pesakit X. Jika anda mendapat produk di sini, (dan tiada apa-apa dalam Tube 1), Patient X mungkin mempunyai DNA HIV dalam DNAnya. Sekiranya anda mendapat produk dalam kedua-dua Tube 1 dan Tube 2, anda mempunyai masalah pencemaran dan anda tidak dapat mengetahui sama ada HIV dalam sampel Pesakit adalah dari penyakit atau dari pencemaran.

Jadi anda sentiasa menjalankan kawalan air (air di tempat DNA).