Mengapa DNase dan lysozyme dalam langkah-langkah lisis yang digunakan semasa pembersihan protein?

Mengapa DNase dan lysozyme dalam langkah-langkah lisis yang digunakan semasa pembersihan protein?
Anonim

Jawapan:

Untuk membersihkan Fraksi Protein …

Penjelasan:

Sekiranya anda memurnikan protein (sering spesifik), anda perlu menyingkirkan sampah sebanyak yang anda boleh terikat kepada mereka.

Ia bergantung kepada sejauh mana protein anda selepas itu, tetapi secara umumnya ia adalah idea yang baik, terutamanya dalam persiapan pembersihan, untuk menyingkirkan sebanyak mungkin kekotoran.

1:

Oleh kerana protein umumnya besar, dan akibatnya akan muncul di bahagian bawah pecahan (ultracentrifuged) anda, anda ingin menyingkirkan apa-apa asid nukleid, terutama jika protein anda berkhasiat seperti Pol1, Reverse Transcriptase atau mana-mana enzim lain yang terlibat dalam Replikasi / Transkripsi / Terjemahan..

Anda boleh memisahkan asid nukleik yang terdapat di dalam sampel dengan menggunakan DNAse: ini akan menghidrolisis DNA sepenuhnya ke dalam bahagian konstituennya.

Fikiran anda, terdapat pelbagai DNAse, semuanya berbeza dalam mekanisme dan spesifikasi untuk substrat mereka. Bergantung pada DNAse yang digunakan, ia boleh menunjukkan sama ada Endo- atau Exo- aktiviti tuklease …

Lebih dari itu, RNAse adalah lebih sesuai, kerana RNA biasanya lebih banyak dalam rentang apungan / pecahan protein, dan boleh terikat pada protein.

2:

Lysozyme: Enzim yang mempunyai sekurang-kurangnya dua fungsi:

Ia enzim deglycosylates: Kebanyakan protein yang dibawa dalam aliran darah adalah Glycosylated: mereka mempunyai beberapa molekul gula yang melekat pada mereka. Lysozyme akan mengeluarkan residu gula.

Ia juga mempunyai keupayaan untuk memecah dinding sel bakteria Gram-Positif, menyebabkan mereka lyse. (jika anda ingin membersihkan protein dari bakteria Gram-positif)

Mana-mana produk terdegradasi, sama ada asid nukleik atau puing-puing gula, akan muncul di bahagian atas Tabung Sentrifuge kerana keapungan "ringan" mereka ….