Apakah pertukaran ion kromatografi? + Contoh

Apakah pertukaran ion kromatografi? + Contoh
Anonim

Jawapan:

Ini adalah proses untuk memisahkan protein yang berlainan berdasarkan caj dan sifat mengikat mereka kepada bahan.

Penjelasan:

Pada pH yang berlainan, protein berbeza membawa caj berbeza. Dengan meletakkan campuran protein pada pH yang ditetapkan, anda boleh mempunyai campuran yang mengandungi protein dengan sifat cas berbeza.

Sekiranya campuran protein ini dituangkan ke dalam lajur yang mengandungi bahan dengan caj di atasnya lajur akan mengikat protein dalam cas yang bertentangan.

Anda kemudiannya boleh menggunakan penyelesaian yang berbeza yang mengandungi jumlah ion yang berbeza untuk elute (unstick) protein dari lajur.

Sebagai contoh, katakan anda mempunyai campuran protein di mana anda ingin membersihkan protein tertentu. Jika anda tahu bahawa pada pH tertentu protein anda dikenakan secara positif anda boleh mencurahkan campuran ke dalam lajur yang mengandungi bahan yang dikenakan negatif.

Semua protein yang tidak membawa caj, atau apabila dikenakan caj negatif akan terus mengalir melalui lajur. Anda kemudiannya boleh melepaskan protein berprotein positif anda dengan membanjiri lajur dengan ion positif yang akan menyelesaikan cas negatif pada lajur. Pertandingan ini kemudiannya akan menyebabkan protein anda menarik untuk dielakkan.

Inilah contoh kejadian ini.

Setiap dulang mengandungi penampan pada kepekatan yang berbeza dan seperti yang dapat dilihat dalam sampel 175 mM (sudut kiri atas) protein merah / coklat yang sangat kecil terikat pada membran yang dikenakan kerana terdapat persaingan antara ion di dalam penampan dan protein untuk tapak mengikat yang dikenakan pada membran (Ion dalam penimbal telah "menang" kerana terdapat lebih banyak daripada mereka dan oleh itu mereka telah menghalang protein dari mengikat). Dalam sampel di bahagian bawah kanan banyak protein telah terikat pada membran kerana terdapat ion yang lebih sedikit hadir untuk bersaing untuk mengikat tapak.

Dalam video ini anda boleh melihat kromatografi pertukaran anion yang beroperasi: