Mengapa GAPDH digunakan di Western Blot? + Contoh

Mengapa GAPDH digunakan di Western Blot? + Contoh
Anonim

Jawapan:

GAPDH sering digunakan sebagai kawalan pemuatan.

Penjelasan:

Di Western blotting kita sering menggunakan GAPDH sebagai kawalan loading. Apa yang dimaksudkan ialah dengan meneliti GAPDH, kita dapat memeriksa bahawa kita mempunyai sejumlah protein yang sama pada lorong yang berbeza.

Contoh penggunaan - katakan kita mempunyai penyakit yang kita fikir menyebabkan ketinggian protein tertentu dalam sel. Kami akan membuat sampel dari sel-sel "sihat" dan sampel lain dari sel-sel "berpenyakit". Kami kemudiannya akan memuatkan jumlah protein yang setara dengan kedua-dua sampel ke gel untuk pembersihan Barat.

Selepas meneliti kelebihan protein protein kita, kita mendapati bahawa dalam sel-sel yang berpenyakit, tahap protein memang tinggi (iaitu jalur yang lebih gelap dihasilkan pada penipisan). Untuk membuktikan bahawa peningkatan dalam protein ini disebabkan oleh perubahan ungkapan di dalam sel, bukannya artefak pemuatan (iaitu, band yang lebih kuat disebabkan oleh perubahan dalam ungkapan protein dalam sel-sel, dan bukannya secara tidak sengaja kita memuatkan lebih banyak daripada sampel "penyakit" daripada "sihat"), kami juga akan meneliti kesalahan untuk GAPDH untuk menunjukkan bahawa jumlah protein keseluruhan adalah sama di kedua-dua lorong.

Oleh itu, dengan melakukan ini, kami menunjukkan bahawa protein bersamaan telah dimuatkan di kedua-dua lorong tersebut dan bahawa perubahan dalam intensiti band yang kita amati adalah disebabkan oleh perubahan dalam ungkapan protein untuk protein yang menarik.