Kenapa penglihatan barat digunakan untuk mengesahkan elisa? + Contoh

Kenapa penglihatan barat digunakan untuk mengesahkan elisa? + Contoh
Anonim

Jawapan:

Biasanya ini adalah ujian kelesuan antibodi.

Penjelasan:

Dalam ELISA, sangat sukar untuk mengetahui sama ada antibodi atau antibodi anda mengikat protein protein anda, protein yang sama sekali berbeza, atau pelbagai protein.

Blot Barat akan digunakan untuk memeriksa kekhususan antibodi (anda harus perhatikan bahawa Blot Barat tidak dapat mengesan semua tindak balas silang dengan protein yang tidak betul).

Di Blot Barat, anda boleh melihat saiz protein yang antibodi mengikat (anda tidak boleh dalam ELISA). Oleh itu, sebagai contoh, jika antibodi anda harus mengikat protein 56 kDa dan anda melihat sebuah band di ~ 56 kDa pada blot maka anda yakin dengan yakin bahawa antibodi itu mengikat protein yang betul.

Jika, sebaliknya, anda melihat sebuah band di 32 kDa anda boleh menyimpulkan bahawa antibodi itu mengikat protein yang salah. Begitu juga, jika banyak band muncul di blot Barat maka itu akan mencadangkan (jika tiada degradasi protein) bahawa antibodi itu mengikat kepada pelbagai protein yang berbeza.

Dalam contoh 32 band kDa yang muncul di gel, dan juga pelbagai band, ia akan menunjukkan bahawa antibodi tidak mempunyai kekhususan bagi ELISA dan bahawa sebarang hasil yang dilihat dalam ELISA mungkin tidak spesifik untuk protein yang menarik.

Sekiranya saya menjalankan ujian semacam ini, saya mungkin termasuk reagen "campur tangan" untuk menguji antibodi. Sebagai contoh, jika saya telah membangkitkan antibodi saya kepada peptida, saya boleh memasukkan peptida dalam penyelesaian antibodi utama untuk menguji untuk mengikat yang betul. Iaitu, dengan kehadiran peptida saya tidak akan melihat sebarang band atau tiada hasil daripada ELISA kerana antibodi utama saya tidak akan dapat diikat kerana terdapat lebihan peptida.