Dalam ujian ELISA, apakah antibodi utama & antibodi sekunder yang dilakukan?

Dalam ujian ELISA, apakah antibodi utama & antibodi sekunder yang dilakukan?
Anonim

Jawapan:

Itu bergantung kepada jenis ujian ELISA.

Penjelasan:

ELISA = Enzyme Linked Immunosorbent Assay.

Terdapat pelbagai jenis ujian ELISA. Apa yang anda perlukan adalah:

  • antibodi dengan enzim yang melekat padanya
  • antigen yang mengikat antibodi
  • substrat enzim yang menyebabkan tindak balas yang boleh diukur

The enzim melekat pada antibodi sering HRP (peroxidase lobak). HRP boleh bertindak balas dengan substrat yang berbeza sama ada perubahan warna atau mengeluarkan cahaya, kedua-duanya boleh diukur.

Imej menunjukkan gambaran keseluruhan jenis yang berbeza daripada ujian ELISA. Saya akan menerangkan bagaimana mereka bekerja di bawah.

ELISA langsung

Plat dilapisi dengan antigen (Ag) dan a antibodi utama dengan enzim ditambah. Apabila substrat ditambah, tindak balas akan berlaku dan berkadar dengan jumlah antibodi-antigen interaksi.

ELISA tidak langsung

Sekali lagi, plat disalut dengan antigen dan a antibodi utama mengikat antigen. A antibodi sekunder ditambah yang mengikat antibodi pertama. Antibodi ke-2 mengandungi enzim yang bertindak balas dengan substrat.

Sandwich ELISA

Di sini dua atau tiga antibodi terlibat. Antibodi penangkapan dilampirkan pada plat dan mengikat antigen. Ini diikuti oleh langkah-langkah yang sama seperti sama ada langsung (hanya satu antibodi) atau kaedah tidak langsung (dua antibodi).

ELISA yang kompetitif

Kadang-kadang dipanggil penghapusan ELISA, sedikit lebih rumit. Plat dilapisi dengan antigen untuk diteliti. A antibodi utama dengan enzim pertama diinkubasikan dengan sampel dengan kepekatan yang tidak diketahui antigen yang sama. Ini kemudiannya ditambah pada plat, yang membolehkan antibodi yang masih bebas untuk bertindak balas dengan antigen pada plat. Selepas kompleks antibodi-antigen sampel dibersihkan substrat ditambah.

Apabila sampel yang tidak diketahui mempunyai banyak antigen, akan ada antibodi yang kurang bebas untuk mengikat ke plat = isyarat yang lebih rendah.